TA克隆
TA克隆方法(Original TA Cloning Kit)把PCR片段与T载体DNA连接起来的方法。通过PCR的方法扩增目的基因片段,往往由于缺失或其他原因无法获得准确的DNA序列。通常需要通过TA克隆的方法重组到T-载体中,再使用通用引物测出准确DNA序列。
由于在PCR过程中使用的DNA聚合酶不同往往分为2种情况:
· 使用Taq酶,Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A,因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接
· 使用高保真的DNA聚合酶,如pfu酶,由于其不能在扩增产物的3末端加上A, 得到的DNA序列为钝端
因此,需要在回收纯化后进行加A的过程,通常是以PCR回收产物为模板加上一定量的普通Taq酶和反应液,加入dATP(或dNTP),72°C 10分钟,然后将加A产物直接用于TA连接。
TA克隆需要提供的信息 |
样品名称 |
片段大小 |
是否纯化 |
产物是否带有A尾 |